土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù):
1.分離菌株的思路
(1)自然界中目的菌株的篩選
、僖罁(jù):根據(jù)它對生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。
②實例:PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶,就是從熱泉中篩選出來的Taq細菌中提取出來的。
(2)實驗室中目的菌株的篩選
、僭恚喝藶樘峁┯欣谀康木晟L的條件(包括營養(yǎng)、溫度.pH等),同時抑制或阻止其他微生物生長。
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理:培養(yǎng)基的氮源為尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖,而受到抑制,所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
、诜椒ǎ耗芎铣呻迕傅募毦拍芊纸饽蛩。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌。
2.統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
(1)稀釋涂布平板法(間接)
、佼敇悠返南♂屸炎銐蚋邥r,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。
、谕ㄟ^統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。
(2)利用顯微鏡直接計數(shù)
3.分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的脲酶將尿素分解成氨,氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌,若指示劑變紅,可確定該種細菌能夠分解尿素。
4.實驗流程
土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定
知識拓展:
1、Taq細菌是耐高溫的微生物。
2、培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。配置培養(yǎng)基時根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求,加入某些物質(zhì)或出去某些營養(yǎng)物質(zhì),一直其他微生物的生長,也可以根據(jù)某些微生物對一些物理、化學(xué)因素的抗性,在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),從而篩選出待定的微生物。這種培養(yǎng)基叫做選擇培養(yǎng)基。
3、測定微生物數(shù)量的方法:
①直接計數(shù)法:常用顯微鏡直接技術(shù)法,一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細胞菌體的計數(shù)。
、陂g接計數(shù)法:常用稀釋平板計數(shù)法,平板培養(yǎng)基上長出一個菌落就代表原待測樣品中一個微生物個體。4、通常用來作為菌種鑒定的重要依據(jù)的是菌落。