分解纖維素的微生物的分離:
(1)實(shí)驗(yàn)原理:
、偻寥乐写嬖谥罅坷w維素分解酶,包括真菌、細(xì)菌和放線(xiàn)菌等,它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶,可以把纖維素分解為纖維二糖,進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用,故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中,纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng),其他微生物則不能生長(zhǎng)。
、谠谂囵B(yǎng)基中加入剛果紅,可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素被分解后,紅色復(fù)合物不能形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,從而可篩選纖維素分解菌。
(2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
土壤取樣:采集土樣時(shí),應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境
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梯度稀釋?zhuān)河眠x擇培養(yǎng)基培養(yǎng),以增加纖維素分解菌的濃度
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梯度稀釋
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涂布平板:將樣品涂布于含剛果紅的鑒別纖維素分解菌的固體培養(yǎng)基上
挑選產(chǎn)生中心透明圈的菌落:產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈,從產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落上挑取部分細(xì)菌,并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上,在30~37℃條件下培養(yǎng),可獲得較純的菌種。
剛果紅染色的兩種方法的比較:
知識(shí)拓展:
1.纖維素與纖維素酶
(1)纖維素
、倩瘜W(xué)本質(zhì):一種多糖。
、诜植迹好藁ㄊ亲匀唤缰欣w維素含量最高的天然產(chǎn)物,此外,木材、作物秸稈等也富含纖維素。
(2)纖維素酶
、倭(xí)慣上,將纖維素酶分成三類(lèi):C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶。C1酶是對(duì)纖維素最初起作用的酶,破壞纖維素鏈的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。Cx酶是作用于經(jīng)C1酶活化的纖維素、分解β-1,4-糖苷鍵的纖維素酶。β葡糖苷酶可以將纖維二糖、纖維三糖及其他低分子纖維糊精分解為葡萄糖。
、谧饔茫豪w維素纖維二糖
葡萄糖
2、為確定得到的微生物是纖維素分解菌,還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法,一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖繼素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定。