酶的制備和活力的測定:
酶活力(enzymeactivity):也稱為酶活性,是指酶在催化一定的化學(xué)反應(yīng)時表現(xiàn)出來的能力,通常用酶促反應(yīng)的速率即酶促反應(yīng)過程中單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示。酶活力的高低會受溫度、pH、激活劑等多種因素的影響。酶的提取一般選擇在低溫和適合的pH下進(jìn)行,有時還要加入酶的激活劑以提高酶活力。例如,從植物材料中提取果膠酶就是在低溫、偏酸性的提取液和NaCl作激活劑的條件下進(jìn)行的。
一、制備果膠酶
1、實驗材料和器具:新鮮的水果或蔬菜;質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的NaCl溶液,0.1mol/L冰醋酸;研缽,剪刀,漏斗,紗布或濾紙,燒杯,精密pH試紙,試管,酒精燈,離心機(jī),榨汁機(jī)等。
2、果膠酶的制備:
。1)將50g新鮮的水果或蔬菜洗凈,在預(yù)冷的研缽內(nèi)用剪刀迅速剪碎后研磨,邊研磨邊加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%NaCl溶液50mL,制成勻漿。
。2)漏斗中放置濾紙或5層紗布過濾勻漿液,收集濾液。
。3)以4000r/min的離心速率離心濾液15min。注意使用同一規(guī)格的離心管,離心管內(nèi)濾液的高度不超過離心管長度的2/3,離心前要確保在離心機(jī)中對稱放置的離心管(內(nèi)含濾液)的質(zhì)量相等。(4)離心完畢后,果膠酶主要存在于離心管的上清液中,迅速地將上清液倒入潔凈的小燒杯內(nèi),用0.1mol/L冰醋酸將pH調(diào)至3~4,在0~4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
二、觀察果膠酶對蘋果勻漿液的作用
1、用榨汁機(jī)制作蘋果勻漿液,將勻漿液置于90℃的恒溫水浴中保溫4min。冷卻后再過濾,收集濾液。
2、取兩支試管,編號為1和2,分別加入30mL濾液,再向試管1中加入30mL保存?zhèn)溆玫纳锨逡,向試?中加入經(jīng)過90℃水浴保溫4min后的上清液30mL,振蕩搖勻兩支試管,置于室溫下。
3、觀察兩支試管中蘋果勻漿液的澄清程度變化,并將結(jié)果記錄在下表中。
知識點撥:
注意事項:
在溫度、pH影響酶活性的實驗中,始終都貫穿著對照原則,而在設(shè)置對照實驗時最重要的是運(yùn)用單一變量原則,其中的變量就是我們所研究的對象,所以在分析實驗問題時,要緊緊抓住研究變量,把其他可能影響實驗結(jié)果的變量變?yōu)槌A,才能保證對照實驗結(jié)果的嚴(yán)密性和準(zhǔn)確性。對于溫度對酶活性影響的關(guān)系曲線,在低于最適溫度時,活性受溫度影響比高于最適溫度時的小。