多聚酶鏈式反應擴增DNA片段:
1、PCR原理:在解旋酶作用下,打開DNA雙鏈,每條DNA單鏈作為母鏈,以4中游離脫氧核苷酸為原料,合成子鏈,在引物作用下,DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈,即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內DNA的復制過程。DNA的復制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、PCR反應過程是:變性→復性→延伸
3、結果:上述三步反應完成后,一個DNA分子就變成了兩個DNA分子,隨著重復次數(shù)的增多,DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應過程都是在PCR擴增儀中完成的。
細胞被DNA復制與PCR技術的比較:
知識點撥:
1、DNA分子復制的人工控制
解開螺旋:在80~100℃時,DNA雙螺旋打開,形成兩條DNA單鏈,稱為變性。
恢復螺旋:在50~60℃左右時,兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結構,稱為復性。
復制條件:緩沖液,DNA模板、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種引物。
控制儀器:PCR儀(溫度周期性自動調節(jié)儀)。
2、PCR的含義是多聚酶鏈式反應。
3、PCR技術反應的條件:①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境;②DNA模板;③合成引物;④四種脫氧核甘酸;⑤DNA聚合酶;⑥溫控設備
4、PCR技術最突出的優(yōu)點是快速、高效、靈活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特點是:耐高溫。
知識拓展:
1、DNA含量的測定——分光光度法
2、DNA聚合酶不恩能夠從頭合成DNA,只能從DNA的3'端開始延伸DNA鏈,因此DNA復制需要引物。